X-射线诱导大肠癌细胞PCD与p53转录表达改变

　　讨　　论　　研究证明，p53基因的功能一方面主要是对MDM-2发挥调控作用，如果p53基因对MDM-2失控，则MDM-2表达过度，导致细胞发生癌变。另一方面，p53可刺激p21的合成，抑制细胞的分裂周期。亦即p53刺激p21，p21再抑制cdk4，进而抑制细胞生长［4～6］。近年来的研究发现，许多肿瘤治疗方式都可以诱导肿瘤细胞PCD，在此过程中p53基因起着十分重要的作用［7］。研究认为［1，2］，缺乏p53基因的胸腺细胞对射线不敏感，但却保留了对用糖皮质激素处理可致凋亡的正常反应。Stephens等［8］用不同剂量的γ射线照射小鼠卵巢癌细胞，凋亡的数量是未照射组的5～6倍，此时p53表达增强。Clarke和Lowe等［1，2，9］还证明，只含一个p53基因的杂合子小鼠胸腺细胞对辐射诱导的PCD的抵抗力大于含两个p53基因的纯合子小鼠细胞，而剔除了p53基因的小鼠对PCD的抵抗性最强。作者以X-射线照射HT-29、Lovo两种大肠肿瘤细胞，发现5 Gy剂量即可引起细胞一定程度的损伤，但给予10 Gy以上剂量时细胞生长抑制更明显(与对照组及5 Gy组相比，P＜0.05)。并表现出PCD的特征，而15 Gy、20 Gy、25 Gy剂量之间没有明显的差别(存活细胞OD值之比P＞0.05)。

　　作者进一步应用IHC和ISH检测了两种细胞经X-射线照射后(10 Gy) p53蛋白和mRNA表达情况。结果两种细胞中p53 mRNA表达的水平 较对照组增高(P＜0.05)，说明两种细胞在X-射线诱导的大肠肿瘤细胞PCD中伴有p53基因的转录改变。与此同时，HT-29细胞中p53蛋白表达明显增强(与对照组相比P＜0.05)，而在Lovo细胞中则同样不能检测到p53蛋白的表达。由此说明，p53基因在两种细胞中参与作用的方式不尽相同。推测可能与两种细胞中含有不同类型p53基因有关。HT-29细胞含突变型p53(mt p53)，Lovo细胞中含野生型p53(wt p53)［4］。当细胞受到X-射线的刺激后，由于损伤或相应的多种刺激信号经过某种途径传向调节p53基因转录的系统，使其mRNA转录增强。由于HT-29中为mt p53，增强的mRNA包含mt p53 mRAN成分，进而表达出增强的p53蛋白，所以用IHC法可以检出。而在Lovo细胞，由于其中仅存在wt p53，经上述因素作用后，损伤信号传入调节p53基因的系统，使其转录增强。此增强的mRNA中也仅含wt p53，它们的表达可能导致wt p53蛋白的高表达，但由于wt p53蛋白半衰期短，作者应用IHC不能检出。p53高表达，使细胞阻滞后G1向S期的转化过程中，保证细胞有足够的时间进行自我修复。修复成功后细胞就向正常转化。如果修复失败，细胞就表现出PCD现象，最后致细胞死亡。可见，p53基因在X-射线诱导的大肠癌细胞PCD中起着十分重要的作用。

　　季代金，男，硕士，主治医师。

　　参考文献

　　［1］Lowe SW， Schmitt EM， Smith SW， et al. p53 is required for radiation-induced apoptosis in mouse thymocytes〔J〕. Nature， 1993，362:847

　　［2］Clarke AR， Purdie CA， Harrson DJ， et al. Thymocyte apoptosis induced by p53-dependent and independent pathways〔J〕. Nature，1993，362:849

　　［3］季代金.原位杂交技术〔M〕.见：姜泊，张亚历，周殿元，主编.分子生物学常用实验方法.北京.人民军医出版社，1996：128

　　［4］Fearon ER， Vogelstein B. A genetic model for colorectal tumorigenesis〔J〕. Cell，1990，61:759

　　［5］Kopnin B. Genetic events responsible for colorectal tumor genesis achievements and charllenges〔J〕. Tumor，1993，79:235

　　［6］Hamilton SR. The molecular genetics of colorectal neoplasia〔J〕.Gastroenterology，1993，105:3

　　［7］季代金，张亚历，姜泊，等.p53基因诱导程序化死亡与肿瘤治疗新战略〔J〕.癌症，1997，16：389

　　［8］Stephens LC， Aug KK， Schultherss TE， et al. Apoptosis in irradiated murine tumors〔J〕.Radiat Res，1991，127:308

　　［9］Clarke AR， Gledhill S， Hooper ML， et al. p53 dependence of early apoptotic and proliferative responses within the mouse intestinal epithelium gamma-irradiation〔J〕. Oncogen，1994，9:1767